domingo, 8 de enero de 2012

Cómo esterilizar medio de cultivo y materiales para cultivo in vitro

Cómo esterilizar el medio de cultivo.
Una vez preparado el medio de cultivo que vamos a utilizar, procedemos a esterilizarlo.


Acordarse de corregir el pH antes de proceder y remover la mezcla bien antes de verterla en los frascos para que no haya grumos ni frascos con más agar, etc.
Puedes subir el pH (hacerlo más básico, menos ácido) con hidróxido sódico, y bajarlo (hacerlo más ácido) con ácido clorhídrico o sulfúrico. Cualquiera de ellos se encuentran en tiendas de droguería o en tu "establecimiento asiático 24h habitual". El hidróxido sódico es sosa cáustica, el clorhídrico salfumán.

Material necesario
  1. Papel de aluminio
  2. Pinzas de disección
  3. Papel de filtro (papel grueso, como el de filtro de máquina de café)
  4. Gasas
  5. Algodón en trozitos
  6. Discos de algodón (desmaquillantes). Sirven para secar y como filtros
  7. Tijeras, bisturís
  8. Cualquier cosa que creas que vas a necesitar dentro de la cámara estéril
Pinzas

Discos de algodón

Papel de filtro de cafetera

Preparación
  1. Se coloca en el fondo de la olla la rejilla que servirá para que los botes no entren en contacto directo con la olla y estallen.
  2. Normalmente se llenan los frascos con unos 2 a 4 cm de medio de cultivo.
  3. Se les coloca la tapa sin cerrarla del todo. La tapa se tapa con un papel de aluminio (doblado varias veces para que sea fuerte), que debe abrazar la tapa y el cuello del frasco pero con cuidado de que la tapa no llegue a cerrar el frasco.
    Puedes utilizar gomas elásticas para sujetar el papel de alumnio sobre la tapa del bote. Así entrará menos aire y se evitarán posibles salpicaduras.
    También se pueden hacer dos capas de papel de aluminio, una bien apretada y sujeta con gomas elásticas (que actuaría como la tapa de metal del frasco). De esta forma se facilita el desmoldado del pastel, ya que se evita que haya una tapa de rosca (la tapa de papel de aluminio no tiene rosca).
  4. Se colocan los frascos sobre la rejilla y se ponen a hervir unos 30 - 45 minutos contando desde que comienza a hervir de nuevo. Hay que encontrar el punto para poder dejar la tapa puesta y sólamente dejando salir un poco el vapor, sin que se salga estrepitosamente o salpique el interior de los frascos, pero sin que el agua deje de hervir.

Esterilización de otros materiales
Como vamos a esterilizar los botes podemos aprovechar para esterilizar otros materiales.
Para ello, los materiales que esterilicemos se colocarán dentro de la olla, en una rejilla que colocaremos a su vez encima de los botes (o si encaja justo con el ancho de la olla).
Es decir, los botes quedarán en un "sanwich" de dos rejillas, una abajo en contacto con la olla (para que no se revienten), y otra arriba sujetando los materiales a esterilizar.

Todos los materiales se lavarán y secarán bien con gasa limpia, se pulverizan ligeramente con alcohol y se colocan envueltos en papel de aluminio doblado una o dos veces para hacerlo más resistente.
Una forma es doblar el papel con el material en el medio como si fuera la masa de una empanadilla
Cuantos menos recovecos, dobleces y arrugados del papel más fácil será mantener el exterior limpio. Si no, se contaminará fácilmente y contaminará el resto del material.

A mi se me ocurre dar una pequeña forma abovedada con los bordes algo levantados para arriba.
De esta forma una vez esté esterilizado podemos limpiar fácilmente el exterior al verter desinfectante encima, que correrá por encima y se acumulará sin desbordarse del envoltorio.

Paquete justo antes de doblar los bordes 

 Paquete con los bordes doblados

Pinzas en un paquetito de papel de aluminio con forma que evita el derrame de líquido (azulito para que se vea)

También sería útil colocar todo el material recién esterilizado en un "tuper" u otro recipiente con tapa, rociado por dentro con alcohol y cerrado herméticamente, y si se puede, guardado en el congelador.