lunes, 23 de enero de 2012

Cómo hacer una siembra aséptica de hongos con jeringuilla

Preparados los medios de cultivo (y transcurridos unos días para asegurarnos que no crece nada) es momento de preparar la solución de esporas para sembrar en nuestro agar.

Una de las formas más sencillas es utilizar una jeringuilla.

Ya hemos elaborado una jeringuilla de esporas en un post anterior, pero en condiciones poco asépticas.
Una opción más segura de cultivas sólo las esporas y no las bacterias que las acompañan, las del ambiente, etc, es la de desinfectar las esporas de los hongos.
Para ellos usamos alcohol de 96º.
Las esporas poseen cubiertas muy resistentes que las hacen menos vulnerables. Aún así, parte de ellas no serán viables y serán destruidas sin remedio.

Material necesario
  • 0,01 g de esporas de hongos micorriza/simbióticos
  • Espátula pequeña para pesar
  • Báscula de precisión 0,01g
  • Vidrio de reloj o placa de Petri
  • Alcohol de 96º
  • 1 Jeringuilla de 10 ml con aguja (nueva)
  • 1 ampolla de 10ml de agua bidestilada
  • Mechero de alcohol, vela
Preparación
La preparación es la misma que en el post "Siembra de hongos con jeringuilla", sólo que colocaremos las esporas en una espátula o cucharilla:
  1. Colocando la báscula cerca del mechero, pesamos las esporas en la cucharilla y añadimos alcohol en la misma cucharilla hasta humedecerlas por completo.
  2. Removemos un poco las esporas
  3. Dejar evaporar el alcohol unos 5 minutos, asegurándose de que la llama del mechero está bien cerca.
  4. Una vez se ha evaporado el alcohol vertimos un poco de agua bidestilada en la cucharilla y vamos aspirando con la jeringuilla (con la aguja puesta).
  5. Después de varios lavados rellenamos el resto de la jeringuilla con agua.
  6. Dejar un poco de aire dentro para evitar que se presione por accidente y se pierda contenido o se maten las esporas al pasar la aguja por la llama.
  7. Pasar la aguja por la llama y tapar con el capuchón. 
  8. Agitar un poco y listo.
  9. Usar o almacenar en refrigeración hasta su siembra (en las próximas 12/24h).
 Aspecto final
Jeringuillas con la mezcla de esporas:
SIN es la jeringuilla con las esporas no tratadas con alcohol. Tiene una concentración inicial de 0.10g /10 ml de esporas.
CON es la jeringuilla con las esporas tratadas con alcohol. Tiene una concentración inicial de 0.01 g /10 ml de esporas(10 veces menor que la anterior).

Siembra
Puesto que se ha elaborado una jeringuilla estéril, se ha intentado seguir con una siembra estéril.
Visita la entrada de Siembra de hongos micorriza en agar y coco.