viernes, 20 de enero de 2012

Siembra de hongos con jeringuilla

Preparados los medios de cultivo (y transcurridos unos días para asegurarnos que no crece nada) es momento de preparar la solución de esporas para sembrar en nuestro agar.

Una de las formas más sencillas es utilizar una jeringuilla.

Es importante mantener la máxima asepsia posible ya que las esporas comerciales no se venden ausentes de microbios. Por tanto sembraremos inevitablemente otros microbios.
Si no extremamos precauciones cultivaremos montoooones de bacterias en lugar de hongos.

Material necesario
  • 0,10 g de esporas de hongos micorriza/simbióticos
  • Espátula pequeña para pesar
  • Báscula de precisión 0,01g
  • Vidrio de reloj o placa de Petri
  • Alcohol de 96º
  • 1 Jeringuilla de 10 ml con aguja (nueva)
  • 1 ampolla de 10ml de agua bidestilada
  • Mechero de alcohol, vela
Preparación

  1. Lavarse las manos hasta los codos, cara, recogerse el pelo. Usar mascarilla y guantes.
  2. Rociar el espacio a usar (previamente limpio) con alcohol.
  3. Encender el mechero y colocar a su lado la báscula y encima el vidrio de reloj previamente rociado con alcohol de 96º que se deja evaporar.
  4. Cerca de la llama del mechero, abrir el bote de esporas y con la espátula pesar 0,10g.
  5. Con una mano abrir la ampolla de agua bidestilada cerca de la llama, y con la otra quitar el tapón de la aguja y absorber aproximadamente la mitad del agua con la jeringuilla.
  6. Pasar la aguja por la llama y tapar con el tapón a un lado mientras vaciamos el resto del agua en el vidrio de reloj, lavando las esporas. Si usamos una placa de petri colocar algo debajo para que quede inlcinada y sea más sencillo lavar las esporas.
  7. Destapar la jeringuilla e ir absorbiendo las esporas sin volver a echar agua hacia fuera. Cuando quede muy poca remover bien previamente intentando dejar lo menos posible, apenas una gota repartida.
  8. Dejar un poco de aire dentro para evitar que se presione por accidente y se pierda contenido o se maten las esporas al pasar la aguja por la llama.
  9. Pasar la aguja por la llama y tapar con el capuchón. 
  10. Agitar un poco y listo.
  11. Almacenar en refrigeración hasta su siembra (en las próximas 12/24h).
 Aspecto final
Jeringuilla con la mezcla de esporas

Detalle en el que se aprecia la alta concentración de esporas, que precipitan fácilmente.