viernes, 10 de febrero de 2012

Cultivo de alubias en medio estéril: Experimento

Voy a intentar cultivar dos semillas de alubia en medio estéril para comprobar lo difícil que resulta, aprender y corregir si se puede para poder sembrar semillas estériles si me hace falta.

Material necesario para las alubias
  • 30 ml de agua destilada o bidestilada estéril
  • Jeringuilla estéril con aguja
  • Lejía comercial apta para desinfección de agua de bebida (en este caso de concentración 40g de hipoclorito sódico por litro a salida de fábrica según fabricante)
  • Placas de petri
  • Agua destilada
  • Mechero de alcohol
  • Una gota de detergente líquido comercial
  • 10ml de agua bidestilada apirógena
  • 2 alubias comerciales
Procedimiento
Es conveniente tener las precauciones comunes: lavarse manos y brazos, cara, recogerse el pelo, usar guantes y mascarilla, trabajar cerca de la llama o el vapor de una olla, evitar corrientes de agua y rociar las superficies y el aire con alcohol.
  1. Mezclamos a partes iguales 10 ml de solución de 40g de hipoclorito por litro y 10 ml de agua destilada.
  2. Bañamos las alubias un par de minutos en la solución elaborada al 2% y una gota de jabón para humectar.
  3. Aclaramos las alubias 2 veces con 10ml de agua destilada unos minutos.
  4. Añadimos 10 ml y dejamos reposar las alubias 48 h en la placa de petri.
Material necesario para el medio de cultivo
Para preparar el medio de cultivo usaré:
  • 10 g de dextrosa
  • 10g de agar agar
  • 1000 ml de agua destilada
  • Sustancia
  • 2 vasos de tubo de plástico
  • Film transparente
  • 2 filtros de papel
  • Antibiótico comercial (amoxicilina + ác. clavulánico)
Preparación
  1. Se calienta el agua a la que se va añadiendo la dextrosa, el agar y la sustancia.
  2. Rociamos los vasos por dentro con alcohol y los mantenemos cerca de la llama.
  3. Dejamos cocer unos 10-15 min sin que hierva mucho y sin parar de remover.
  4. Vertemos el agar en los vasos de tubo y los mantenemos cerca de la llama..
  5. En una placa de petri rociada con alcohol introducimos los filtros de papel (recortados hasta el diámetro del vaso) y espolvoreamos el antibiótico.
  6. Introducimos los discos en la superficie con cuidado intentando que no se hunda.
  7. Tapamos con film transparente y dejamos enfriar.
Uno de los tubos de plástico se ha agrietado a lo largo, y aunque no tiene síntomas de contaminación, creo que no servirá.
El otro, el disco de antibiótico se ha hundido casi hasta el final.
Si con suerte he puesto antibiótico suficiente, no se contaminarán, así que seguiré aunque no espero éxito.

Como las alubias no estaban ablandadas previamente, ahora habrá que destapar un cuadradito de agar y meter la semilla...con la confianza de que no se contamine en el proceso, que la semilla no esté contaminada, que el medio tampoco y que germine...no veo muchas posibilidades peeeeero.

Antes de introducir las alubias he añadido un poco de antibiótico al agua que las humedecía para empaparlas de antibiótico.

Así que a por ello, con el mechero cerca se destapa el film, se recorta un trocito de agar con una hoja esterilizada a la llama, se introduce la alubia y se tapa con el agar. Se vuelve a tapar con film y a esperar a ver.

Actualización 28/02/2012.
De momento las semillas están intactas, ningún cambio :(
En uno de los tubos ha aparecido una colonia fúngica superficial en el borde del vaso, por lo que no crecerá mucho. De momento prefiero no abrir el tubo y dejar la colonia.